Análisis comparativo del perfil polifenólico en cáscara de punica granatum cultivada en Guanajuato y Oaxaca

Abstract

El presente trabajo de tesis consistió en analizar comparativamente el perfil polifenólico de los extractos obtenidos a partir de la cáscara de Punica granatum, cultivada en los estados de Guanajuato y Oaxaca, por extracción convencional (EC) y extracción asistida por ultrasonido (EAU). La EC se llevó a cabo a temperatura ambiente (22 ± 2 °C), sin agitación ni exposición a la luz por 24 h, y la EAU se realizó a 20 ± 3 °C empleando un baño ultrasónico a 280 W, 40 ± 2.4 kHz por 10 min. En ambos casos se emplearon 0.2 g de polvo de cáscara de P. granatum y 10 mL de etanol (70%). Se realizaron etapas consecutivas de extracción, hasta que el contenido de polifenoles totales fue menor o igual al 10% en cada una con respecto a la suma del CPT de todas las etapas realizadas. Posteriormente, se analizó comparativamente la composición de los 4 extractos estudiados por cromatografía de líquidos de ultra desempeño acoplado a un espectrómetro de masas con analizador cuadrupolo- tiempo de vuelo (UPLC- QToF). Por último, para la asignación de los compuestos sin contar con el reactivo comercial, se realizaron experimentos de MS/MS con perfil de energía de colisión (10, 20 y 30 V). Los resultados mostraron que, en la tercera etapa de extracción el CPT fue menor al 10% para las 4 muestras, con respecto a la sumatoria del CPT las 3 etapas realizadas. Por otro lado, los rendimientos de los extractos obtenidos tanto por EC y EAU fueron mayores para la muestra de Oaxaca, no obstante, presentaron un menor CPT; a pesar de esto dichos valores se encuentra dentro de lo reportado para otros residuos agroindustriales. Sin embargo, de acuerdo al análisis de varianza realizado, se observó que estadísticamente no hubo diferencia significativa tanto en los rendimientos de los extractos como para el CPT obtenidos de cada tipo de extracción y por el contrario en los orígenes sí (a un nivel de significancia de 0.05) , lo cual se confirmó por la prueba de Tukey. Respecto a los cromatogramas, se observó que fueron similares en la mayoría de las señales de los 4 extractos analizados, pero con intensidad diferente, lo que puede sugerir que tienen la misma composición, pero difieren en cuanto a su concentración. Las señales de los tiempos de retención (tR ) 3.10 y 3.17 se observaron únicamente en los extractos de Guanajuato obtenido por EC y EAU. Por otro lado, las señales a los tR de 11.67 y 13.83 min, se observaron únicamente en los extractos obtenidos por EAU de ambos orígenes. Lo anterior, sugiere que el ultrasonido permitió la liberación de un mayor número de metabolitos contenidos en las muestras. Se observó que la intensidad de las señales en los cromatogramas de los extractos de las muestras de Guanajuato fue mayor, lo que puede asociarse a una mayor concentración de los compuestos presentes. Lo anterior puede deberse a la composición del suelo y clima de donde provienen los frutos utilizados en este trabajo. También se identificaron 47 compuestos con un error de masas igual o menor a los 5 mDa, todos ellos ya han sido reportados en cáscara de P. granatum. Se identificó un compuesto que solamente se ha reportado para el jugo de P. granatum (hexósido de floretina), y tentativamente otro que hasta el momento no ha sido reportado para granada (pseudotsuganol). Los fragmentos de estos compuestos fueron comparados con base de datos y un programa de predicción de espectros. Finalmente, las conclusiones fueron que: 1) Se requirieron 3 extracciones sucesivas para reducir a menos del 10% el CPT en la muestra para ambos métodos de extracción, siendo la de Guanajuato la que presentó el mayor rendimiento, 2) Se identificaron 49 compuestos distribuidos de la siguiente manera: 41, 38, 27 y 23 en la EC_Oax, EC_Gto, EAU_Oax y EAU_Gto, respectivamente, y 3) En los 4 extractos se identificaron 2 compuestos uno de los cuales únicamente ha sido reportado en jugo de granada (hexósido de floretina) y otro que fue asignado tentativamente como pseudotsuganol.